精氨酸脱亚氨酶的表达、纯化和活性研究

目的:建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线。方法:人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶(arginine deiminase,ADI)的基因,构建pBV220-ADI原核表达载体,转染大肠杆菌DH5α中并诱导表达目的蛋白,离子交换层析和分子筛层析法纯化目标蛋白。采用体外精氨酸降解试验测定纯化产物活性。结果:成功构建了原核表达载体pBV220-ADI,基因测序正确。转化大肠杆菌DH5α后筛选到高水平表达目的蛋白的菌株,目标蛋白以包涵体形式存在于胞浆内,表达水平超过全菌体蛋白的35%。采用盐酸胍溶解包涵体、低温条件下稀释和透析的方法进行复性。顺次采用阳离子交换和凝胶过滤层析对复性液进行纯化,最终获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明,纯化的ADI比活性为80IU/mg。结论:成功构建了ADI的高效表达菌种,建立了目标物质的分离纯化方法。