巢式聚合酶链反应检测感染树鼩中乙型肝炎病毒DNA

[目的]运用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测人HBV在树鼩体内感染,并探讨Nested-PCR在村鼩感染模型研究中的意义.[方法]用本实验室自繁树鼩,无感染史,年龄在1 d龄至4月龄的树鼩,经肌肉、腹腔或者股静脉等多种途径接种人HBV(约含1×107 HBV DNA copies/ml).接种后定期抽血,用 Nested-PCR检测血清中的HBVDNA情况.[结果]在111只感染了人HBV的树鼩血清中,经Nested-PCR检测,共有46只树鼩检测出HBVDNA,动物感染的阳性率为41.44%(46/111).其中1～30 d龄的66只树鼩检测出HBV DNA的有33只,阳性率50%;31 d龄至4 月龄的45只树鼩检出HBV DNA的有13只,阳性率28.89%,两者阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05).在Nested-PCR检测过程中,所有的动物血清的第1轮PCR扩增结果均为阴性,经第2轮PCR扩增则出现阳性结果.Nested-PCR扩增产物经测序证实为目的基因(HBV C区)的序列.[结论]选择幼年树鼩感染HBV,可提高树鼩的感染率;Nested-PCR比普通PCR方法更敏感、更特异,能有效的提高树鼩血清中HBV DNA的检出率,有较大的实用价值,为研究树鼩感染人HBV模型建立了一种良好的检测方法.