模拟表位型EB病毒感染诊断抗原的制备

目的 利用大肠埃希菌表达系统获取模拟表位型诊断抗原用于EB病毒(epstein-Barr virus,EBV)感染的早期诊断,并初步评价其抗原性.方法 将EB病毒模拟表位GP125、F1、A2、A3 C2多肽序列用特定连接臂串联,密码子优化后全基因合成;将目的片段插入带有Trx标签的表达质粒中,在大肠埃希菌中进行表达,并利用亲和层析和离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blot技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立EBV-IgM抗体检测捕获法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力.结果 所获取EBV模拟表位诊断抗原浓度为2.8 mg/ml,纯度为99.01％;Western blot实验发现,以anti-Trx单克隆抗体或EBV-IgM阳性血清作为第一抗体,在NC膜约26×103处都可以发现特异条带(与预期一致);对50份EBV急性感染阳性血清和50份阴性血清进行检测得出,阳性血清样本OD值1.352 (95％ CI:1.233 ～1.489)与阴性血清样本OD值0.135(95％ CI:0.113 ～0.159)分布区组明显(P＜0.05),其中灵敏度为98.0％,特异性为96.0％,一致性检验kappa值为0.940,一致性优异.结论 原核表达与亲和及离子交换层析纯化可以获取抗原性良好的EBV感染诊断抗原,偶联HRP后可以作为检测抗原应用于EBV-IgM捕获法ELISA血清学检测中.