人骨髓间充质干细胞在不同输注液中的生存和生长

背景:间充质干细胞移植技术快速发展,需要异地移植病例不断增加,但是关于细胞保存运输条件的研究甚少。目的:比较几种临床常用输注液及实验室配制的输注液对间充质干细胞生存和生长的影响。方法:抽取健康志愿者髂骨骨髓,采用密度梯度离心和贴壁筛选相结合的方法,分离培养骨髓间充质干细胞。对骨髓间充质干细胞进行细胞形态、细胞表面标记和多向分化能力的鉴定。25℃条件下,用10%FBS-DMEM、细胞输注液和5种临床常用细胞输注液(9g/L氯化钠注射液、50g/L葡萄糖注射液、50g/L葡萄糖氯化钠注射液、2%和5%的人血白蛋白溶液)保存第3代骨髓间充质干细胞,检测1,2,4和6h细胞的存活率。然后4℃条件下,以细胞输注液保存骨髓间充质干细胞,检测2,4,8,12,24h细胞的存活率和存活细胞的生长曲线。结果与结论:第3代骨髓间充质干细胞呈均匀一致的长梭形,平行或旋涡状紧密排列。细胞表面标记CD44、CD105表达阳性,CD45表达阴性。成骨诱导3周后,长梭形骨髓间充质干细胞变成多角形,vonKossa染色可见典型的黑色钙化小结;成脂诱导2周后,细胞变成短梭形或椭圆形,油红O染色可见胞浆内密集的被染成红色的脂滴。在25℃条件下,细胞输注液中保存的骨髓间充质干细胞,其存活率远高于在上述5种临床常用输注液中所保存细胞;4℃条件下,细胞输注液和完全培养基中保存的骨髓间充质干细胞存活率和再生长能力基本相同。提示细胞完全培养基成分配制的输注液是维持间充质干细胞脱离培养环境后保持细胞活性,且延长细胞存活时间最适宜的溶液。