基于AMPK/GSK-3β/Nrf2信号通路探讨补骨脂相反相成配伍减毒机制

目的 探讨补骨脂的反成配伍对大鼠肝脏的减毒作用及作用机制.方法 80只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、补骨脂组、补骨脂+制何首乌1:1组、补骨脂+制何首乌1:2组、补骨脂+制何首乌2:1组、补骨脂+熟地黄1:1组、补骨脂+五味子1:1组,每组10只大鼠.除空白组外,其他组皮下注射氢化可的松(25 mg/kg)制备肾阳虚大鼠模型,每日1次,连续注射14 d.大鼠建立肾阳虚模型后,给予相应药物干预,各组给药剂量均为12.6 g/kg,连续灌胃4周.HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化.酶联免疫吸附测定检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、直接胆红素(DBIL)和总胆红素(TBIL)水平,以及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达水平.实时荧光PCR检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA的表达.蛋白质印迹法检测AMP活化蛋白激酶(AMPK)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/Nrf2信号通路中磷酸化AMP K(p-AMP K)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、Nrf2、HO-1的蛋白表达.结果 与补骨脂组比较,补骨脂与补阴药制何首乌、熟地黄及五味子配伍后大鼠肝小叶结构改善,炎性浸润细胞减少.与补骨脂组比较,补骨脂+制何首乌1:2组、补骨脂+熟地黄1:1组、补骨脂+五味子1:1组大鼠血清中AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL水平均降低(P<0.01);补骨脂+制何首乌1:2组大鼠肝组织SOD、GSH-Px、MDA的表达改善(P<0.01);补骨脂+制何首乌1:2组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA水平上调(P<0.01),Keap1 mRNA水平下调(P<0.01);补骨脂+制何首乌1:2组、补骨脂+制何首乌2:1组、补骨脂+熟地黄1:1组、补骨脂+五味子1:1组p-AMPK、p-GSK-3β、Nrf2、HO-1蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01).结论 补骨脂配伍补阴药制何首乌、熟地黄及五味子可改善补骨脂所致的肝损伤,其作用机制可能是通过激活AMP K/GSK-3β/Nrf2信号通路,抑制氧化应激状态来发挥对肝脏的保护作用,补骨脂与何首乌配伍比例1:2减毒效果最佳.