砷及其代谢物对BEAS-2B细胞p53基因表达影响

[背景]砷是人类致癌物.砷及其代谢物会影响p53表达,但砷及其代谢物处理人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)后,p53磷酸化及泛素化水平的变化尚不清楚. [目的]探讨砷及其代谢物一甲基胂酸(MMA)和二甲基胂酸(DMA)对BEAS-2B细胞中抑癌基因p53表达的影响. [方法]用不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)染毒细胞,利用CCK-8试剂检测细胞活力,确定NaAsO2染毒BEAS-2B细胞的剂量和时间.基于细胞活力结果,将细胞分为两组,即不同浓度亚砷酸钠组和砷甲基化代谢产物组,不同浓度亚砷酸钠组染毒剂量分别为0、2、4、6 μmol·L-1 NaAsO2;砷甲基化代谢产物组包括 0 μmol·L-1 NaAsO2(对照组)、6 μmol·L-1 MMA组、6 μmol·L-1 DMA组和 6 μmol·L-1 NaAsO2 组.48 h收集细胞,提取总蛋白和总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测p53 mRNA相对表达水平,采用免疫共沉淀和蛋白质免疫印迹法检测p53泛素化水平,通过蛋白免疫印迹法检测p53蛋白、p53 Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白的相对表达水平. [结果]在BEAS-2B细胞中,与对照组相比,不同浓度NaAsO2 染毒后,细胞存活率均降低(P<0.05),并且NaAsO2 浓度在 6 μmol·L-1 时细胞存活率约为 50%.与对照组相比,不同浓度的NaAsO2(2、4、6 μmol·L-1)处理后p53 mRNA相对表达水平呈逐渐降低趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NaAsO2 诱导p53蛋白、Ser9位点磷酸化蛋白相对表达水平均逐渐降低(P<0.05);不同浓度的NaAsO2 诱导p53 Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平均呈逐渐降低趋势,但仅 6 μmol·L-1NaAsO2 组低于对照组且差异具有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,MMA组和DMA组p53 mRNA、p53蛋白、Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平无明显影响.与对照组相比,NaAsO₂染毒后,p53泛素化表达水平明显下降,K48位点泛素化表达水平下降. [结论]砷引起BEAS-2B细胞p53蛋白表达降低主要由于其磷酸化途径被抑制和mRNA表达降低,p53泛素化水平减少所致的蛋白变化未占主导作用.MMA和DMA对p53基因表达无影响.