低血清培养对PRRSV NX-1株在Marc-145细胞中增殖的影响

本研究旨在探索低浓度血清培养条件对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NX-1株在宿主细胞Marc-145中增殖的影响.首先,用感染复数(MOI)为0.2的PRRSV NX-1株接种Marc-145细胞1.5h后,分别用含0、1％和2％胎牛血清(FBS)的维持液培养72 h,显微镜下观察细胞形态变化,通过CCK-8法检测细胞活力;采用间接免疫荧光法(IFA)和荧光定量PCR法分别检测病毒感染后病原在细胞中的表达定位及其ORF7基因的表达;最后,用Reed-Muench法检测病毒滴度.结果显示,感染后第72小时,Marc-145细胞出现明显的细胞病变(CPE),2％FBS培养时比1％FBS的CPE更明显;细胞活力检测结果显示,感染后第24和48小时,添加FBS时显著增强细胞的活力,感染后第72小时,添加2％FBS组的细胞活力显著低于其他2组;在添加1％或2％FBS培养时,IFA显示在细胞胞质中抗原阳性信号较强,而在无FBS培养细胞中信号弱.当维持液中添加FBS培养72 h时,病毒ORF7基因在宿主细胞中的表达显著高于无血清组,且2％FBS组的表达量显著较高,其相应病毒液的滴度也显著高于其他2组.上述结果表明,PRRSV NX-1株感染Marc-145细胞后,在含2％血清的培养基中病毒的增殖能力和毒株感染力较强.