猪苓多糖通过JAK2-STAT3通路抑制N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基诱导的GES-1细胞上皮间充质转化

目的 研究猪苓多糖抑制胃黏膜上皮细胞(GES-1)间充质转化的作用和机制.方法 应用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基(MNNG,40μmol·L-1)诱导GES-1细胞间充质转化模型,造模同时给予猪苓多糖(1.25、2.50、5.00、10.00 mg·mL-1)处理24、48 h后,CCK-8法检测细胞增殖能力;造模同时给予猪苓多糖(5.00 mg·mL-1)处理48 h后,实时定量PCR(qRT-PCR)法检测猪苓多糖对 N-cadherin、Snail、Twist、Fibronection 及 Vmention mRNA表达的影响;Western blotting法检测 E-cadherin、N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetin、Vimentin、STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2 蛋白表达.裸鼠分别 sc经 MNNG 40 μmol·L-1 处理48 h后的 GES-1 细胞(5 × 107·mL-1,0.2 mL)、胃癌细胞 SGC7901(5× 107·mL-1,0.2 mL,阳性对照),1个月后观察各组成瘤及体质量情况,注射局部进行HE染色后行组织病理学观察,验证GES-1细胞经MNNG处理后是否达到肿瘤阶段.结果 与模型组比较,随猪苓多糖浓度的增加,GES-1细胞增殖能力逐渐上升,到达5mg·mL-1时增殖能力最高,差异显著(P＜0.01、0.001);猪苓多糖组N-cadherin、Snail、Twist、Fironetion 及 Vimentin 的 mRNA表达均显著下降(P＜0.05、0.01、0.001);猪苓多糖组 E-cadherin 蛋白表达显著上升(P＜0.05),N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetion、Vimentin 及通路蛋白STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2表达显著下降(P＜0.05、0.01、0.001).对照组和MNNG处理的GES-1 组未见瘤体形成,阳性对照SGC7901组注射后1周左右局部出现瘤体,1个月瘤体长至6 cm左右;MNNG处理的GES-1组裸鼠精神较差,体质量明显减轻,SGC7901组裸鼠状态差,体质量大幅减轻;对照组和MNNG组病理染色显示为正常的皮肤组织,阳性对照组显示为肿瘤组织.结论 猪苓多糖可能通过抑制JAK2-STAT3通路干预MNNG诱导的GES-1细胞上皮间充质化.