虾青素通过激活MAPK信号通路诱导睾丸生殖细胞瘤细胞凋亡和自噬

为了研究虾青素对睾丸生殖细胞瘤细胞株NCCIT和NT2细胞凋亡、自噬的影响及可能的作用机制,用梯度浓度的虾青素对NCCIT和NT2细胞进行处理后,采用MTT实验、台盼蓝拒染法和细胞克隆实验检测各组细胞的增殖速率;采用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Hoechst33258荧光染色法观察各组细胞的形态变化;采用Western-blot法检测细胞凋亡相关蛋白质(Bcl-2、Bax、caspase-3、PARP)、自噬蛋白(Beclin1、LC3)的表达水平,以及MAPK信号通路蛋白质细胞外信号调控的激酶(extracellular signal-re-gulated kinase,ERK)、c-Jun氨基端激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)、p38的表达及磷酸化水平.结果显示,与空白对照组比较,虾青素处理组中NCCIT和NT2细胞的增殖速率明显降低,细胞凋亡率增加(P＜0.05),细胞出现体积变小、细胞核荧光强度增高、核固缩等凋亡特征,同时,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax、自噬蛋白Beclinl和LC3Ⅱ表达上调.此外,虾青素可剂量依赖性地增加ERK、JNK、p38的磷酸化水平.以上结果表明,虾青素可抑制睾丸生殖细胞瘤细胞系(NCCIT/NT2)生长,诱导细胞凋亡和自噬,其机制可能与虾青素激活MAPK信号通路有关.