自制ISCOMATRIX与CpG联合的HCA587蛋白疫苗的制备及其免疫效应评估

目的 确定自制免疫刺激复合物(ISCOMATRIX)作为HCA587蛋白疫苗佐剂的有效剂量,并探讨其与CpG联合作为HCA587蛋白疫苗佐剂的免疫效力和肿瘤治疗效果.方法 应用透析法将Quil A、胆固醇和磷脂制备成ISCOMATRIX,经磷钨酸负染并采用透射电子显微镜观察自制ISCOMATRIX的结构.建立小鼠免疫模型,将联合CpG的HCA587蛋白疫苗与不同剂量的自制ISCOMATRIX佐剂混合,经尾根部皮下免疫小鼠;采用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测产生IFN-γ 的脾细胞频数,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HCA587特异性抗体水平.在小鼠右侧胁腹部皮下接种B16-HCA587肿瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,按照处理方式不同将小鼠分为HCA587蛋白疫苗治疗组(接种100μL包含CpG与最佳剂量的自制ISCOMATRIX的HCA587蛋白疫苗)与PBS对照组(注射100 μL的无菌PBS),使用游标卡尺测量肿瘤大小.结果 自制ISCOMATRIX佐剂呈典型的蜂窝状结构,直径20～30 nm,大小均一.12、36 μg(QuilA浓度分别为0.012％、0.036％)的自制ISCOMATRIX组小鼠脾细胞分泌IFN-γ 的频数与商品化ISCOMATRIX阳性对照组比较,差异无统计学意义(均P＞0.05),且显著高于 CpG+36 μg ISCOM 对照组与 PBS 组(均 P＜0.000 1);5 μg 与 18μg自制 ISCOMATRIX 组小鼠分泌 IFN-γ 的脾细胞频数,高于CpG+36 μg ISCOM对照组与PBS组(均P＜0.000 1),但低于商品化ISCOM组(P=0.004).12、18与36 μg自制ISCOMATRIX组的血清HCA587抗体水平与商品化ISCOM阳性对照组比较,差异无统计学意义(均P＞0.05);与PBS组相比,12μg自制ISCOMATRIX组1 × 104倍稀释血清的抗体滴度显著升高(P=0.006 2).与PBS对照组相比,HCA587蛋白疫苗治疗组肿瘤生长速度减缓,且第35天测量时肿瘤大小显著较小(P=0.018 1).结论 以12μg自制ISCOMATRIX作为佐剂联合CpG制备的HCA587蛋白疫苗能诱导有效的免疫应答,并抑制荷瘤小鼠的肿瘤的生长,具有一定的肿瘤治疗作用.