基于核酸适配体的金黄色葡萄球菌快速检测试纸条的研制和应用

[目的]建立能快速检测金黄色葡萄球菌的胶体金免疫层析法.[方法]制备胶体金并表征,将其与核酸适配体连接后进行表征并喷涂于结合垫,以金黄色葡萄球菌多克隆抗体为检测线、核酸适配体互补序列为质控线制备试纸条,对样品垫与结合垫处理液、样品稀释液、重悬液、T线抗体浓度、适配体连接浓度等试验条件进行优化以获得最佳条件,同时检测试纸条的增敏效果,在最佳条件下对试纸条的灵敏度、特异性进行测试,制备人工污染样品用以评估试纸条在实际样品检测中的效果.[结果]胶体金粒径为20 nm左右,表征结果显示,胶体金与核酸适配体成功连接;试纸条样品垫与结合垫处理液、样品稀释液的最优条件为不同成分的SELEX缓冲液,金标适配体重悬液为HEPES重悬液,T线抗体浓度为2 mg/mL,适配体连接浓度为1 μmol/L;用40 mmol/L羟胺与0.5％氯化金水溶液增敏,检测灵敏度为1×104 CFU/mL,且具有良好的特异性,对于人工污染的肉样和奶样进行检测,灵敏度为1×105 CFU/mL.[结论]本研究成功建立金黄色葡萄球菌试纸条检测方法,且该方法特异性良好,为进一步探讨核酸适配体在病原菌检测中的应用提供了理论依据.