两种结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物耐药性检测方法比较及不一致原因初探

目的:评估荧光PCR熔解曲线法(简称"熔解曲线法")对结核分枝杆菌氟喹诺酮类药物(FQs)耐药性的诊断价值,分析其与表型药物敏感性(简称"药敏")试验结果不一致的原因.方法:采用简单随机抽样的方法,随机选取2019年1月至2020年6月期间来自重庆市39个区(县)经菌种鉴定和比例法药敏试验确定为耐多药结核病的126例患者的临床分离株,分别采用微量肉汤稀释法和熔解曲线法对左氧氟沙星(Lfx)和莫西沙星(Mfx)进行表型药敏及分子药敏试验.以表型药敏试验结果为标准,评价熔解曲线法对FQs耐药的检测效能,并采用全基因组测序(WGS)对表型药敏和分子药敏试验不一致的结果进行分析.结果:以表型药敏试验结果为标准,熔解曲线法对FQs耐药检测的敏感度和特异度分别为94.5％(86/91;95％CI:87.1％～98.0％)和100.0％(35/35;95％CI:87.7％～100.0％).两种方法结果不一致者有12株,不一致率为9.5％(12/126).表型药敏试验耐药而熔解曲线法敏感者5株,WGS显示2株未见gyrA耐药基因相关突变,2株存在gyrB基因突变(该4株菌的最低抑菌浓度值,Lfx为1～2μg/ml,Mfx均为0.5 μg/ml),1株发现gyrA基因Asp94Ala突变,突变频率为15.3％.表型药敏试验敏感而熔解曲线法耐药7株,其中5株发现gyrA基因Ala90Val突变,1株发现gyrA基因Asp94Ala突变,1株发现gyrA基因Asp94Asn突变,该7株菌对Lfx和Mfx的最低抑菌浓度范围分别为1～2 μg/ml和0.25～0.5μg/ml.结论:熔解曲线法对FQs耐药的检测效能较好,FQs异质性耐药菌的比例及低水平耐药相关突变是影响FQs熔解曲线法检测效能及导致其与表型药敏试验结果不一致的主要原因.