猪繁殖与呼吸综合征类NADC30 PRRSV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为快速检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-2)并从中鉴别诊断NADC30-like PRRSV,根据PRRSV-2的ORF6基因及类NADC30的2个靶点Nsp9和ORF5基因片段分别设计3对特异性引物和探针,建立了 一种三重荧光定量RT-PCR检测方法.结果显示,Ct值与标准品在1× 109～1×101拷贝/μL范围内存在良好的线性关系,R2均＞0.990,最低检测浓度为10拷贝/μL;该方法特异性强,与其他基因亚型的PRRSV和其他主要猪源病毒无交叉反应;重复性分析结果显示,组内、组间变异系数均小于1％,呈现出良好重复性.应用建立的三重荧光定量RT-PCR 检测方法对116份NADC30-like PRRSV样品进行检测,符合率为98.28％,对458份临床样品进行检测,2对引物单独使用时对NADC30-like PRRSV的检出率分别为36.03％(165/458)和32.3％(148/458),而2对引物同时使用时,NADC30-like PRRSV的检出率明显提高,为44.5％(204/458).因此,本研究建立的三重荧光定量RT-PCR检测方法可用于PRRSV-2检测,可快速区分出NADC30-like PRRSV,可为PRRSV的防控提供技术支持.