非洲猪瘟病毒数字PCR检测方法的建立及比较

ZHAO Xiaona, TAN Xiao, ZHU Zhongwu, ZHOU Ping, ZHU He, LU Guanya, SHI Min, SHENG Wei,TANG Taishan,ZHU Changqing, KONG Fande

Animal Husbandry & Veterinary Medicine（2023）

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摘要

为建立一种特异性强、灵敏度高、重复性好的非洲猪瘟病毒(ASFV)检测方法,根据ASFV保守区域设计引物探针,在荧光PCR检测方法的基础上,建立了检测ASFV的微滴数字PCR方法,对其特异性及线性关系进行评估,以阴性样品和低拷贝样品分别测定该方法的空白检测限(LOB)和最低检测限(LOD).结果显示:该方法有较好的线性关系(R2 =0.999),与其他 6 种猪常见病毒及 5 种动物组织无交叉反应,LOB为1.6 copies/μL,LOD为3 copies/μL.利用建立的数字PCR、C1 荧光PCR,以及世界动物卫生组织(WOAH)提供的荧光PCR和常规PCR方法对50 份不同来源的样品进行检测,结果表明,建立的ASFV数字PCR检测方法具有高效、特异、灵敏等特点,可用于非洲猪瘟监测和口岸动物疫病防控.

关键词

African swine fever,droplet digital PCR,real-time PCR

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