人参寡肽-2抗苯并芘诱导人脐静脉内皮细胞炎症损伤活性及机制研究

目的:从人参中分离纯化获得寡肽,并基于苯并芘诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型探究人参寡肽抗苯并芘诱导HUVECs炎症损伤的机制.方法:通过膜超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相的方法,从人参中分离具有保护活性的寡肽;CCK-8法检测并筛选出人参寡肽中抗苯并芘诱导HUVECs损伤活性最好的寡肽;试剂盒检测各组细胞ROS、IL-1β、IL-6、IL-18、NO含量;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;RT-qPCR 和 Western Blot 检测各组细胞芳基烃受体通路(AhR、CYP1A1)、凋亡相关(Bax、Bcl-2、Cyt C、APAF-1、pro-Caspase-9)、NLRP3 通路(NLRP3、ASC、Caspase-1)、PI3K 通路(p-PI3K、p-Akt)基因的 mRNA 和(或)蛋白表达;并进一步利用siRNA技术和抑制剂干扰AhR和PI3K通路的表达,检测各组细胞IL-1β、IL-6、IL-18含量变化.结果:从人参中共分离获得寡肽3个,其中人参寡肽-2(Phe-Thr-Glu-Gly-Pro)抗苯并芘诱导HUVECs损伤的活性最佳;人参寡肽-2可显著降低苯并芘诱导下HUVECs中ROS、IL-1β、IL-18、NO含量及细胞凋亡率和Bax、Cyt C、APAF-1、NL-RP3、ASC、Caspase-1蛋白表达及AhR、CYP1A1 mRNA和蛋白表达,显著升高Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).使用siRNA和抑制剂干扰AhR表达可显著降低IL-1β、IL-18分泌;PI3K抑制剂可进一步提高苯并芘诱导下HUVECs的IL-1β、IL-18分泌.结论:人参寡肽-2可调控NLRP3炎性小体、AhR和PI3K/Akt信号通路,对苯并芘暴露所致人脐静脉内皮细胞的炎症损伤具有保护作用,继而有助于内皮细胞功能损伤后的修复.