脂多糖通过上调CYP1A1环氧化酶活性抑制巨噬细胞精氨酸酶-1的表达

目的 探索细胞色素P450 1A1(cytochrome P450 1A1,CYP1A1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导时巨噬细胞中精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)的调控作用及机制.方法 使用LPS刺激小鼠单核巨噬细胞细胞系RAW264.7(RAW),分为0 h组、12 h组、24 h组(每组设3复孔,n=3),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测CYP1A1、Arg-1 mRNA及蛋白表达;构建阴性对照和高表达、敲除CYP1A1的RAW(NC/RAW、CYP1A1/RAW、CYP1A1 KO/RAW)细胞系以及突变CYP1A1羟化酶活性的RAW(CYP1A1m/RAW)细胞系,分为NC/RAW+LPS组、CYP1A1 KO/RAW+LPS 组、CYP1A1/RAW+LPS 组、CYP1A1m/RAW+LPS 组,使用 LPS 刺激后检测Arg-1 mRNA、蛋白表达及信号转导和转录活化因子 6(signal transducer and activators of transcription-6,STAT6)活化水平;使用STAT6抑制剂AS1517499作用CYP1A1敲除RAW细胞,设立NC/RAW+PBS+LPS 组、NC/RAW+AS1517499+LPS 组、CYP1A1 KO/RAW+PBS+LPS 组、CYP1A1 KO/RAW+AS1517499+LPS组,检测Arg-1 mRNA、蛋白表达;使用CYP1A1环氧化酶活性抑制剂甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiaretic Acid,NDGA)及 12(S)-羟基二十碳四烯酸[12(S)-HETE]作用 RAW 细胞,设立RAW+PBS+LPS 组、RAW+12(S)-HETE+LPS 组、RAW+NDGA+LPS 组,检测 Arg-1 mRNA、蛋白表达及STAT6活化水平.结果 LPS可诱导RAW中的CYP1A1及Arg-1呈错峰高表达(P＜0.05);CYP1A1高表达可抑制LPS诱导时RAW中Arg-1表达(P＜0.05)及STAT6活化,敲除则可增强上述效应(P＜0.05),而STAT6抑制剂AS1517499可消除CYP1A1敲除带来的增强效应(P＜0.05);突变CYP1A1的羟化酶活性或使用其代谢产物12(S)-HETE刺激均不影响Arg-1表达(P＞0.05),而使用CYP1A1环氧化酶抑制剂NDGA可增强Arg-1表达(P＜0.05)及STAT6活化.结论 CYP1A1可通过抑制LPS诱导时巨噬细胞中STAT6活化水平以降低Arg-1表达,但此效应与CYP1A1羟化酶活性及其致炎产物12(S)-HETE无关,而可能与CYP1A1环氧化酶活性有关.