氯化钴模拟法构建绒毛外滋养细胞缺氧模型

目的:探讨适宜的绒毛外滋养细胞(EVT)化学性缺氧模型.方法:选取2022 年4 月至2023 年1 月在广西医科大学第一附属医院妇科选择人工流产的正常孕妇(6～9 孕周)的绒毛组织,分离和培养原代EVT,利用免疫细胞化学进行纯度鉴定.利用氯化钴(CoCl2)构建细胞缺氧模型,CCK-8 实验检测不同浓度(0、50、100、150、300μmol/L和600μmol/L)CoCl2 在不同时间(6、12、24h和48h)对原代EVT细胞存活率的影响,实时荧光定量聚合酶链反应实验(RT-qPCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达.结果:成功分离和培养原代EVT.EVT的细胞存活率与CoCl2 浓度和缺氧时间有关.相对于对照组(0μmol/L),0～150μmol/L浓度组细胞存活率下降不明显;300μmol/L浓度组作用24h后对细胞生长明显抑制.600μmol/L浓度组的细胞毒性作用出现最早,24h后细胞基本全部死亡.150μmol/L CoCl2 缺氧6、12、24、48h各组的HIF-1α mRNA相对表达量分别是对照组(0h)的 0.50 倍、0.64 倍、1.45 倍和 3.00 倍.缺氧时间 24h,50、100、150μmol/L CoCl2 各组的HIF-1α mRNA相对表达量分别是对照组(0μmol/L)的1.23 倍、1.28 倍、1.58 倍.结论:CoCl2 可用于构建原代EVT的化学性缺氧细胞模型,综合CoCl2的细胞毒性作用及HIF-1α mRNA表达水平,CoCl2 的适宜作用浓度是150μmol/L,作用时间是24h.