The Therapeutic Effect and Targets of Shudi Suoyang Formula(熟地锁阳方)on Idiopathic Pulmonary Fibrosis were Preliminarily Explored Based on the Molecular Docking Technology and Experimental Verification

目的:运用分子对接技术与动物实验验证相结合的方法,对熟地锁阳方治疗特发性肺纤维化(IPF)的疗效及其可能的作用靶点进行探究.方法:应用TCMSP结合BATMAN-TCM数据库收集熟地锁阳方的有效成分及其作用靶点,通过Degree评分选取分数较高的化合物作为配体进行分子对接.应用GeneCards、PharmGkb及OMIM等数据库获得疾病靶基因,将药物潜在作用靶基因与疾病靶基因取交集,利用CytoNCA进行拓扑分析,筛选获得核心作用靶点.根据核心靶点及文献研究选取相关靶点作为大分子受体,应用Autodock-Vina软件进行分子对接.同时建立肺纤维化小鼠模型,通过体内动物实验进行验证,运用EMMS eSpira Forced Maneuvers有创肺功能仪检测小鼠的用力肺活量(FVC)、吸气能力(IC),收集小鼠的肺组织、称重并计算肺系数,分别运用HE和Masson法观察小鼠的肺组织病理学变化,Western blotting法检测α-SMA蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR检测VEGFA mRNA、EGFR mRNA相对表达量.结果:共获得115个有效化合物,Degree≥ 110的化合物共有5个,共筛选得到VEGFA、EGFR、MAPK1、TP53、AKTI、MAPK14、TNF、FOS、JUN 9个核心作用靶点.分子对接结果显示,VEGFA、EGFR与上述化合物均存在结合活性,且绝大部分靶点与有效化合物的结合活性较强.动物实验结果表明,与对照组比较,模型组小鼠肺功能FVC、IC均明显降低(P＜0.01),肺系数及肺组织中α-SMA蛋白相对表达量均明显升高(P＜0.01),肺组织病理学显示结构明显被破坏、炎症细胞渗出及胶原沉积增多,肺组织中VEGFA mRNA、EGFR mRNA相对表达量均明显升高(P＜0.01);与模型组比较,熟地锁阳方组小鼠肺功能FVC、IC均明显升高(P＜0.01),肺系数及肺组织中α-SMA蛋白相对表达量均明显降低(P＜0.01),肺组织结构改善明显、炎症细胞渗出及胶原纤维沉积明显减少,肺组织中VEGFA mRNA、EGFR mRNA相对表达量均明显降低(P＜0.01).结论:熟地锁阳方具有抗肺纤维化的作用,其作用靶点可能与VEGFA、EGFR有关.