Dickkopf-1调控Wnt通路在缺氧诱导的晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨缺氧条件下Wnt/β-catenin通路在晶状体上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用,分析Dickkopf-1(DKK-1)的表达对晶状体上皮细胞EMT的影响.方法:将体外培养人晶状体上皮细胞(HLEB3 细胞)分为正常氧培养组(加入含 10%FBS的DMEM培养液)和缺氧培养组(加入含 100μmol/L CoCl2 溶液的培养液进行缺氧处理6、12、24、48h).利用免疫荧光染色法检测Wnt3a和DKK-1 蛋白的表达及β-catenin蛋白的表达和定位;利用qRT-PCR法检测DKK-1 mRNA的表达.结果:免疫荧光染色结果显示,随着缺氧时间的延长,HLEB3 细胞中Wnt3a和DKK-1 蛋白表达水平明显上调,β-catenin蛋白在细胞核内积聚逐渐增多.qRT-PCR检测结果显示,与正常氧培养组相比较,缺氧培养6h组细胞中DKK-1 mRNA无显著差异(P>0.05),而缺氧培养 12、24、48h 组细胞中 DKK-1 mRNA 表达明显增加(P<0.001).结论:缺氧可以激活晶状体上皮细胞 Wnt/β-catenin 通路,并诱导Dickkopf-1 的表达,参与调控 Wnt/β-catenin通路,影响EMT进程.