染色质免疫共沉淀技术在前列腺癌细胞株中的优化

目的 优化染色质免疫共沉淀技术(ChIP)的关键条件,以期提高实验效率.方法 拟以前列腺癌细胞株PC-3、DU145为实验材料,主要对裂解液体积、超声波的功率、脉冲及工作时间等方面进行调整,超声波破碎仪设置不同的条件(25％或30％功率,35 s或50 s间隔,3s或5 s工作时间),然后解交联富集这些DNA片段,测定其浓度及纯度值,分别行聚合酶链反应(PCR)并用2％琼脂糖凝胶电泳检测结果.结果 前列腺癌细胞株合适的ChIP实验条件为:(1)超声波最大功率为30％,设定每38 s行3s或55 s行5s超声工作时间,总的时间45 ～75 s;(2)纯化后的DNA浓度＞10 ng/μl、纯度值(A260/ A280)＞1.45,可以得到比较好的实验结果.结论 在前列腺癌细胞株PC-3、DU145中,选定合适的超声波频率后,总的超声工作时间为60s时,便可得到合适的DNA片段;洗脱液体积固定后,分2次离心要比1次离心所得到的DNA纯度值高,所得到的实验结果也越明显.