刺梨苷对亚砷酸钠致人永生化角质形成细胞凋亡及TGF-β1/ERK信号通路的影响

目的 探讨刺梨苷经TGF-β1/ERK信号通路对亚砷酸钠诱导人永生化角质形成细胞(HaCaT)凋亡的影响.方法 将HaCaT细胞分别暴露于含终浓度为 0(对照组)、0.25 μmol/L亚砷酸钠的培养基中染毒 24 h,然后依次暴露于含终浓度为 0、10-15、10-14、10-13、10-12、10-11、10-10、10-9 mol/L刺梨苷溶液的培养基中继续培养 24 h,采用CCK-8 检测细胞存活率.将HaCaT细胞分为对照组(培养液)、亚砷酸钠组(0.25 μmol/L)、刺梨苷组(10-13 mol/L)、亚砷酸钠+刺梨苷组(0.25 μmol/L亚砷酸钠染毒 24h后,再加入 10-13 mol/L刺梨苷),染毒 24 h,以FITC/PI双染法检测HaCaT细胞凋亡率情况,以实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、Bax和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,0.25 μmol/L亚砷酸钠单独及联合各浓度刺梨苷均能增高HaCaT细胞的存活率,差异有统计学意义(P＜0.05).与 0.25 μmol/L亚砷酸钠组比较,0.25 μmol/L亚砷酸钠联合各浓度刺梨苷均能增高HaCaT细胞的存活率,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着刺梨苷染毒浓度的升高,0.25 μmol/L亚砷酸钠染毒HaCaT细胞的存活率呈先升高后下降的趋势,以 0.25 μmol/L亚砷酸钠+10-13 mol/L刺梨苷组最高.刺梨苷组HaCaT细胞的凋亡率＜对照组＜亚砷酸钠+刺梨苷组＜亚砷酸钠组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,亚砷酸钠组HaCaT细胞凋亡相关基因caspase-3、caspase-9 mRNA及蛋白表达水平和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax蛋白表达水平均增高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05);刺梨苷组HaCaT细胞caspase-3、caspase-9、Bax mRNA及蛋白表达水平和cleaved caspase-3、cleaved caspase-9 蛋白表达水平均下降,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞caspase-9、Bcl-2 mRNA及蛋白表达和Bax蛋白表达水平显著增高,而caspase-3、Bax mRNA表达水平和caspase-3、cleaved caspase-9 蛋白表达水平均降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05).与亚砷酸钠组比较,亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞caspase-3、Bax mRNA及蛋白表达和caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平增高,差异均具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,亚砷酸钠组HaCaT细胞TGF-β1/ERK信号通路相关基因TGF-β1、ERK1/2 mRNA及蛋白表达水平和p-ERK1/2 蛋白表达水平均增高,差异均有统计学意义(P＜0.05);刺梨苷组HaCaT细胞ERK1/2 mRNA及蛋白表达和TGF-β1 蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞TGF-β1 mRNA表达和p-ERK1/2 蛋白表达水平均升高,ERK1/2mRNA及蛋白表达和TGF-β1 蛋白表达均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与亚砷酸钠组比较,亚砷酸钠+刺梨苷组HaCaT细胞TGF-β1 和ERK1/2mRNA及蛋白表达均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 刺梨苷可能通过抑制TGF-β1/ERK信号减轻亚砷酸钠诱导的HaCaT细胞凋亡.