Raptor对髓系细胞破骨分化与骨吸收的抑制作用

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）相关调节蛋白（regulatory associated protein of mTOR，Raptor）对小鼠髓系细胞破骨分化与骨吸收的影响。方法:本研究为随机对照试验，于2020年1月至2021年6月，选取健康B6/C57小鼠10只，随机分为敲除组与对照组，每组5只。其中敲除组通过基因敲除构建髓系细胞特异性敲除Raptor小鼠模型。两组小鼠正常饲养后处死通过试剂盒分离髓系细胞，并通过RANKL诱导形成破骨细胞。通过免疫印迹试验（Western blot）检测破骨分化相关基因转录因子（spi-1 proto-oncogene，PU.1）、组织蛋白酶K（cathepsin K，CTSK）以及Fos蛋白（c-Fos）的蛋白水平；通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测破骨分化相关基因PU.1、CTSK、c-Fos的mRNA水平；通过酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中骨吸收指标I型胶原C端肽（C-telopeptide of type I，CTXI）、I型胶原N端肽（N-telopeptide of type I，NTX1）及尿羟脯氨酸（U-Hydroxyproline，U-HYP）评估骨吸收情况。结果:Western blot结果显示，敲除Raptor后小鼠髓系细胞中破骨分化相关基因PU.1、CTSK、c-Fos的蛋白表达量显著降低，RT-PCR结果显示细胞中PU.1、CTSK、c-FosmRNA表达水平的变化与Western blot结果趋势一致；ELISA结果显示，相比对照组，Raptor敲除小鼠血清CTXI［（185.53±36.69）pg/ml比（124.58±25.77）pg/ml， t=3.040， P=0.016］、NTX1［（2.89±0.37）μg/L比（2.21±0.42）μg/L， t=2.717， P=0.026］及U-HYP［（20.51±2.85）μg/L比（14.49±1.84）μg/L， t=3.968， P=0.004］表达量显著降低。 结论:敲除Raptor能够抑制小鼠髓系细胞破骨分化与骨吸收，证实TOR相关调节蛋白Raptor在破骨细胞分化与骨吸收中发挥关键作用。