基于Cytoflex流式细胞仪的外泌体表征方法

目的 探讨基于Cytoflex流式细胞仪直接表征外泌体的新方法.方法 选择经透射电镜、纳米颗粒追踪、Western blot方法进行常规表征后的外泌体,按照10倍、100倍和1000倍梯度稀释后依托Cytoflex流式细胞仪进行鉴定,并研究不同分离方法、不同超离次数对外泌体特性的影响,同时进一步探究联合标记在外泌体表征的应用可能性.结果 Cytoflex流式细胞仪可基于5～10μl外泌体样本检验粒径分布情况、标志物蛋白表征情况(实验样本CD81表征率可达69.79％,CD63表征率为70.55％)以及外泌体相关分子的表达(神经黏附分子CD171表征率为22.74％).同时,对血清来源外泌体鉴定结果表明发现基于试剂盒的方法分离的血清来源外泌体具有更高的标记率并且富集到更大尺径的颗粒;而不同超离次数的结果启示外泌体粒径大小与超高速离心次数呈负相关关系.结论 Cytoflex流式细胞仪表征外泌体具有客观、直接和高效的特点,这一方法的应用也将极大地丰富了外泌体表征的方式,为外泌体相关研究提供新的思路.