牛LATS2基因启动子克隆及转录调控分析

本研究旨在探究牛LATS2基因组织表达规律,利用相对荧光素酶活性数值确定其启动子核心区域并初步鉴定其核心区域关键转录因子,以阐明牛LATS2基因的转录调控机制.利用RT-qPCR检测牛LATS2基因在心、脾、肝、肾、肺、背最长肌、皮下脂肪、皱胃、大肠及睾丸等中的相对表达量,构建LATS2蛋白进化树.克隆LATS2 基因 5′端非翻译区上游 1.7 kb序列,利用逐段缺失引物,巢式扩增其 7 个启动子区不同截断体缺失片段(-1 792～+179、-1 475～+179、-1 098～+179、-727～+179、-515～+179、-248～+179和-56～+179),并将不同截断体构建至双荧光素酶报告载体pGL3-Basic上.重组的LATS2基因启动子双荧光素载体分别转染小鼠成肌细胞(C2C12)和小鼠脂肪细胞(3T3-L1)细胞系,鉴定其启动子核心区域.进一步借助在线软件JASPAR()和Genomatix()分析启动子核心区域序列特征,并预测关键转录因子结合位点.结果显示,LATS2基因在肝和背最长肌中表达量极显著高于脾(P<0.01);LATS2 蛋白构建的进化树显示反刍动物单独聚为1支,表明LATS2基因在反刍动物进化过程中保守性较高;蛋白质互作分析筛选出的与LATS2 蛋白互作紧密的前10种蛋白质均为Hippo信号通路中的关键蛋白质.LATS2 基因启动子核心区域位于-248～-56,预测其启动子核心区域有与肌肉发育相关的转录因子TEAD1、MEF2A、FOSL1、MyoG和Myod1 的结合位点,表明LATS2 基因在牛肌肉生长发育中扮演重要角色.以上结果为探究牛LATS2基因在肌肉生长发育中转录调控机制奠定基础.