毛状分裂增强子1诱导肝干细胞向胆管细胞的分化

目的 探讨毛状分裂增强子 1(hairy enhancer of split 1,Hes1)调控肝干细胞(liver epithelial progenitor cells,LEPCs)向胆管细胞分化的作用.方法 将 pTRE2hyg-Hes1 和 pTRE2hyg-EGFP-Hes1 转染 LEPCs,不同浓度强力霉素(doxycycline,DOX)诱导 Hes1 的表达.通过 Western blotting、PCR、RT-PCR、Real-time PCR、免疫细胞化学和免疫荧光技术检测相关分子表达.以谷胱甘肽合成酶(glutathione synthetase,Gss)作为肝细胞分化的标记,以角蛋白 19(keratin 19,Krt19)和肝核因子 1β(hepatic nuclear factor 1β,HNF1β)为胆管细胞分化标记.结果 RT-PCR和Real-time PCR检测结果显示,随着 DOX 浓度的增加,Hes1 在 LEPCs 细胞中的表达逐渐增高,当 DOX 浓度为10 μg/mL时,Hes1 表达是未加DOX时的 11.21 倍,第 5 天 Hes1 的表达处于高峰,持续到第 7 天;Western blotting检测结果显示 HES1 蛋白表达也随着 DOX 浓度的增高而有所增加,HES1 表达明显高于未经处理的 LEPCs(P<0.05);免疫细胞化学染色显示,转染了 pTRE2hyg-Hes1 的细胞 98%以上呈阳性染色,见于细胞核和细胞质.当Hes1 在 LEPCs细胞中表达上调后,Gss表达有所下降,Krt19 和 HNF1β表达增加.结论 在 pTet-on和 pTRE2 hyg-Hes1 双转染的 LEPCs中,Hes1 上调可诱导 LEPCs分化为胆管细胞.