木薯MeLOB36基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体构建及验证
Molecular Plant Breeding（2023）
摘要
LBD基因家族是指含有侧生器官边界(lateral organ boundaries,LOB)结构域的一种植物特异性转录因子家族,在植物的生长发育和代谢调控等方面起着至关重要的作用.木薯MeLOB36基因是LBD基因家族成员,前期研究发现该基因在木薯根尖、体细胞胚、脆性胚性愈伤组织表达量较高,推测其参与了木薯植株的形态建成.为了鉴定MeLOB36基因的功能,本研究利用在线软件CRISPR-Pv2.0在保守区域设计靶标MeLOB36 基因的 sgRNA,构建 MeLOB36 基因的编辑载体 pCAMBIA1301-Cas9-MeLOB36-sgRNA.将重组载体转化LBA4404根癌农杆菌后侵染木薯脆性胚性愈伤组织,通过PCR扩增MeLOB36基因编辑靶点及潜在脱靶位点区段序列,进行Sanger测序.结果表明,MeLOB36基因被成功编辑,且未脱靶.本研究有助于进一步获得MeLOB36基因的突变体,从而鉴定MeLOB36转录因子对木薯植株形态建成的影响.
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