回阳生肌汤对RAW264.7巨噬细胞表型极化的影响

目的:探讨回阳生肌汤对体外RAW264.7巨噬细胞极化的作用及可能机制.方法:采用体外培养RAW264.7巨噬细胞,使用脂多糖(LPS)和干扰素γ(IFN-γ)将RAW264.7巨噬细胞诱导为M1型(经典激活型巨噬细胞),白介素(IL)-4使其诱导为M2型(替代激活型巨噬细胞).采用CCK-8法检测回阳生肌汤提取物对巨噬细胞增殖作用.回阳生肌汤提取物预先作用巨噬细胞24 h,LPS+IFN-γ刺激12h后,通过比色法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平;luminex高通量检测技术检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、IL-12、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10、血管内皮生长因子(VEGF)的含量;流式细胞术检测RAW264.7巨噬细胞表面白细胞分化抗原86(CD86)、甘露糖受体(CD206)阳性率;Western Blot检测一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、磷酸化信号传导和转录激活蛋白6(p-STAT6)和STAT6的表达.结果:回阳生肌汤提取物在520、260、130 mg/L时对巨噬细胞有增殖作用;与模型组比较,回阳生肌汤提取物能显著抑制巨噬细胞NO释放(P＜0.01,P＜0.05),抑制IL-1β、IL-6、IL-12分泌,同时促进IL-10分泌(P＜0.01);提高RAW264.7巨噬细胞CD206阳性率(P＜0.01);抑制iNOS蛋白表达,促进Arg-1、p-STAT6蛋白表达(P＜0.01).结论:回阳生肌汤提取物体外可抑制LPS+IFN-γ诱导的RAW264.7巨噬细胞向M1型极化,促进向M2型极化,可能通过激活STAT6信号通路发挥作用.