基于微量液体培养基间接评估鼠疫噬菌体生长方法的建立

目的 利用微量液体培养基建立评估鼠疫噬菌体生长的方法,为今后鼠疫噬菌体的分离、宿主谱鉴定、生物学特性研究等提供技术依据.方法 利用OmniLog TM微生物鉴定系统,检测微生物细胞对不同碳源呼吸代谢导致的显色反应和微生物生长造成浊度差异的原理,采用微量液体培养法检测诊断用鼠疫噬菌体在2株鼠疫耶尔森菌(鼠疫弱毒菌EV76、614F)和4株非鼠疫耶尔森菌(假结核耶尔森菌PTB3、PTB5、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2)的生长情况.结果 实验菌株及诊断用鼠疫噬菌体混合物经OmniLog TM微生物鉴定系统33℃作用48h,以鼠疫疫苗株EV76、鼠疫弱毒菌614F为试验菌,试验行孔的生长曲线呈一条横线,且细菌浓度对数值不超过100;四唑类染料的颜色随着噬菌体数量的减少和宿主菌数量的增多逐渐加深,表明诊断用鼠疫噬菌体能感染鼠疫弱毒菌EV76和614F.以假结核耶尔森菌PTB3、PTB5、大肠杆菌V517、小肠结肠炎耶尔森菌52302-2 4株非鼠疫耶尔森菌为试验菌,每行6孔均呈现几乎相同的对应试验菌株的S型生长曲线,说明诊断用鼠疫噬菌体不能感染对应行的试验菌株.利用OmniLog TM微生物鉴定系统检测诊断用鼠疫噬菌体对6株试验菌株的灵敏度,结果与液体培养基和半固体培养基的常规检测结果一致.结论 成功建立基于OmniLog TM微生物鉴定系统的微量液体培养基间接检测鼠疫噬菌体生长的方法,评估鼠疫噬菌体对宿主菌的敏感度,是一种经济、灵敏、准确的鉴定方法.