超高效液相色谱法同时测定细胞培养液中17种游离氨基酸浓度

建立柱前衍生-超高效液相色谱同时测定高表达程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1,PD-1)抗体的细胞株培养液中17种游离氨基酸浓度的方法,根据浓度检测结果,对表达抗PD-1抗体的细胞株进行氨基酸代谢分析.使用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimidyl carbamate,AQC)作为衍生剂,将不同浓度的氨基酸标准品或细胞株培养液中的游离氨基酸转化为稳定的紫外衍生物,采用ACQUITY UPLC BEHC18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱梯度洗脱分离,流速为0.7 mL·min-1,柱温55℃,进样量为1 μL,在紫外检测器检测波长为260 nm的条件下进行检测,使用外标法计算氨基酸浓度,并对高表达抗PD-1抗体的细胞株培养液中游离氨基酸浓度进行测定,根据细胞培养周期内氨基酸浓度变化进行代谢分析.结果表明,柱前衍生-超高效液相色谱法能在11 min内将17种氨基酸进行完全分离,在0.75～500 μmol·L-1浓度范围内线性关系良好(相关系数R2≥0.999 3),检测限为0.1～0.3μ.mol·L-1,定量限为0.3～1 μmol·L-1,建立的方法具有快速、重现性高的优点,氨基酸代谢分析显示,蛋氨酸、异亮氨酸和亮氨酸可能为细胞株生长和表达限制性成分.建立的柱前衍生-超高效液相色谱法快速、准确,可用于同时检测细胞培养液中17种游离氨基酸浓度的变化.