西黄丸下调HIF-1α/VEGFA/VEGFR2信号通路抑制脑胶质瘤细胞血管生成拟态形成的作用及其机制

探究西黄丸含药血清调控低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)/血管内皮生长因子受体 2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)信号通路,抑制脑胶质瘤细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)形成的作用及机制.采用对雄性SD大鼠连续灌胃给药7天,制备西黄丸含药血清(动物实验伦理审批号:202105A051).采用200 μmol·L-1 CoCl2构建U251细胞低氧模型,给予西黄丸含药血清后,CCK-8法、细胞克隆实验检测U251细胞活力和增殖情况;流式细胞术检测U251细胞凋亡及周期;细胞划痕愈合、Transwell侵袭实验检测U251细胞的迁移与侵袭能力;3D细胞培养检测U251细胞VM的形成情况;Western blot法检测U251细胞HIF-1α、VEGFA、VEGFR2、磷酸化VEGFR2(phosphorylated-VEGFR2,p-VEGFR2)、血管内皮钙黏着蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin)、Eph 受体酪氨酸激酶 A2(Eph receptor tyrosine kinases A2,EphA2)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶14(matrix metalloproteinase 14,MMP14)和层黏连蛋白γ2(laminin γ2)等蛋白表达水平.结果显示,低氧状态下,10％西黄丸含药血清对U251细胞活力、增殖、凋亡和细胞周期影响较小.与低氧模型组相比,10％1.0、1.5和2.0 h组西黄丸含药血清均显著减慢U251细胞的迁移速率(P＜0.01),显著减少侵袭的U251细胞数量(P＜0.01).10％2.0 h组西黄丸含药血清显著抑制低氧状态下U251细胞的VM管状结构形成(P＜0.01).Western blot实验显示,10％西黄丸含药血清显著下调 HIF-1α、VEGFA、phospho-VEGFR2、VE-cadherin、EphA2、MMP14等蛋白表达(P＜0.05).综上所述,西黄丸可通过下调HIF-1α/VEGFA/VEGFR2信号通路,抑制脑胶质瘤U251细胞VM形成,发挥抗血管生成的作用.