基于PI3K/Akt/Beclin-1信号通路探析积雪草苷对OGD/R诱导损伤H9C2心肌细胞的影响

观察积雪草苷(asiaticoside,Ass)对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的H9C2心肌细胞的增殖、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/Bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)信号通路的干预作用,探讨其对H9C2心肌细胞的影响.选用H9C2心肌细胞作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)法检测H9C2细胞活性.将H9C2细胞分成对照组、OGD/R组、Ass低浓度组(10 μmol·L-1)、Ass高浓度组(80 μmol·L-1)和Ass高浓度+氯喹组(80 μmol·L1+50 μmol·L-1).对照组于正常条件下培养,其余各组在处理后进行氧糖剥夺4 h/再复2 h.酶联免疫吸附法检测细胞上清液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)的含量;免疫荧光观察药物对细胞数量的影响;自噬染色检测试剂盒观察细胞自噬;分子对接技术确定Ass分子靶点;蛋白质印迹法检测PI3K、Akt、选择性自噬接头蛋白(P62)、Beclin-1的表达水平.与OGD/R组相比,Ass各组在10～80 μmol·L-1具有保护作用,AST、LDH和CK的含量均降低,PI3K、Akt、P62和Beclin-1蛋白表达水平降低.与Ass组相比,Ass高浓度+氯喹组的AST、LDH和CK的含量均降低,PI3K、Akt、Beclin-1和P62蛋白表达水平均降低.免疫荧光显示抑制剂组、各给药组与模型组相比均具有不同程度的保护作用.综上所述,积雪草苷能够降低OGD/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,降低AST、LDH、CK含量和P62蛋白水平,减少细胞自噬,这可能与其抑制PI3K/Akt/Beclin-1信号通路激活密切相关.