芹菜素对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化和炎症反应的作用及其机制

目的:探讨不同浓度芹菜素(API)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 炎症反应和极化的作用,并阐明其可能机制.方法:将RAW264.7 细胞分为RAW264.7组(不做任何处理)和RAW264.7+API组(2、4、8、16 和32 μmol·L-1 API).药物处理细胞 24 h后,CCK-8 法检测各组细胞增殖率,选取 API实验浓度.将 RAW264.7 细胞分为RAW264.7 组(正常RAW264.7 细胞)、RAW264.7+ox-LDL组(0.08 g·L-1 ox-LDL诱导 24 h)、RAW264.7+ox-LDL+低 剂 量 API 组(2 μmol·L-1 API 和 0.08 g·L-1 ox-LDL 诱 导 24 h)和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组(8 μmol·L-1 API和0.08 g·L-1 ox-LDL诱导24 h),药物处理细胞 24 h,采用油红O染色观察各组RAW264.7 细胞中泡沫细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素 4(IL-4)和白细胞介素 10(IL-10)水平,Western blotting法检测各组细胞中核转录因子κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、信号转导与转录激活因子6(STAT6)、磷酸化STAT6(p-STAT6)和精氨酸酶1(Arg-1)蛋白表达水平.结果:CCK-8法检测,随着API的浓度增加,RAW264.7细胞增殖率降低(P<0.05),选择无毒的低浓度(2 μmol·L-1)和高浓度(16 μmol·L-1)API 作为后续实验 API 浓度.油红 O 染色,RAW264.7 组极少数RAW264.7细胞被油红O染色;RAW264.7+ox-LDL组较多细胞被染成暗红色,胞内脂质明显增加,表明成功建立了RAW264.7源性泡沫细胞;RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组少量细胞被油红O染色.ELISA法检测,与RAW264.7组比较,RAW264.7+ox-LDL组、RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平升高(P<0.05),IL-4和IL-10水平降低(P<0.05);与RAW264.7+ox-LDL 组 比 较,RAW264.7+ox-LDL+低 剂 量 API 组 和 RAW264.7+ox-LDL+高 剂 量 API 组RAW264.7 细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平降低(P<0.05),IL-4 和IL-10 水平升高(P<0.05).Western blotting法检测,与RAW264.7组比较,RAW264.7+ox-LDL组、RAW264.7+ox-LDL+低剂量API组和RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组RAW264.7细胞中iNOS和p-NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05),Arg-1和p-STAT6蛋白表达水平降低(P<0.05);与RAW264.7+ox-LDL 组比较,RAW264.7+ox-LDL+低剂量 API 组和 RAW264.7+ox-LDL+高剂量 API 组RAW264.7细胞中iNOS和p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05),Arg-1和p-STAT6蛋白表达水平升高(P<0.05);与RAW264.7+ox-LDL+低剂量 API组比较,RAW264.7+ox-LDL+高剂量API组RAW264.7细胞中iNOS和p-NF-κB p65蛋白表达水平降低(P<0.05),Arg-1和p-STAT6蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:API能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中泡沫细胞形成和调控巨噬细胞向M2极化,改善炎症反应,其机制可能与NF-κB和STAT6通路有关.