猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

为了制备重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的单克隆抗体,首先,通过在N基因序列5'端添加标签序列,构建重组表达质粒pET28a-PRRSV-N,将其转化至大肠杆菌 BL21感受态细胞中,诱导表达重组PRRSVN蛋白;然后,将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选和亚克隆,制备单克隆抗体并鉴定.SDS-PAGE结果显示,在诱导温度为16℃、0.1mmol/LIPTG、诱导时间12h时,可以表达大小约19 ku可溶性的重组N蛋白;Western-blot分析也证实,重组N蛋白能与PRRSV阳性血清反应;通过间接ELISA筛选得到2株能稳定分泌抗PRRSVN蛋白的单克隆抗体细胞株(4G2、2E5);单抗亚型鉴定表明,单克隆抗体均为IgG1亚型κ轻链;4G2、2E5细胞的培养上清和相应腹水的ELISA检测抗体效价分别为:1∶1 600、1∶800和1∶51 200、1∶51 200.综上,成功制备了可溶性重组PRRSV N蛋白并筛选出特异性的单克隆抗体,这为进一步探究PRRSVN蛋白的结构和功能以及PRRSV诊断试剂的研制奠定了基础.