miR-486-5p/PINK1通路调控线粒体自噬拮抗SK-N-SH细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤

目的 探究微RNA-486-5p/PTEN诱导激酶1(miR-486-5p/PINK1)通路调控线粒体自噬对SK-N-SH细胞糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的影响及机制.方法 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测45例缺血性卒中(IS)患者和45例健康体检者血清miR-486-5p表达.双荧光素酶报告基因验证SK-N-SH细胞中miR-486-5p对PINK1的靶向关系.取对数生长期SK-N-SH细胞分为:Control、OGD/R、OGD/R+miR-486-5p mimic、OGD/R+miR-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组.噻唑蓝(MTT)法检测 细胞存活率,RT-qPCR检测 miR-486-5p、PINK1、帕金蛋白(Parkin)mRNA 表达,Western blot 检测 PINK1、Parkin、微管相关蛋白 1 轻链 3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin1、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素C(CytC)蛋白表达,流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量及细胞凋亡率.结果 IS组患者血清miR-486-5p表达较健康体检者明显降低(P＜0.01).miR-486-5p可以结合PINK1的3'端非编码区(P＜0.01).与Control组比较,OGD/R组细胞miR-486-5p、p62的表达及细胞存活率明显降低(P＜0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC 的表达及细胞凋亡率明显升高(P＜0.001).与 OGD/R 组比较,OGD/R+miR-486-5p mimic 组细胞 miR-486-5p、p62 的表达及细胞存活率明显升高(P＜0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC 的表达及细胞凋亡率明显降低(P＜0.001).与 OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC 组比较,OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1 组细胞 miR-486-5p、p62 的表达及细胞存活率明显降低(P＜0.001),PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1、ROS、caspase-3、caspase-9、CytC 的表达及细胞凋亡率明显升高(P＜0.001).结论 miR-486-5p 可拮抗SK-N-SH细胞OGD/R损伤,可能与抑制PINK1/Parkin通路进而抑制线粒体自噬有关.