无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株种子批传代稳定性研究

目的 检定无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株主代种子及工作种子,验证工作种子连续传代30代次的传代稳定性,为伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗无动物源工艺的建立提供前期研究数据.方法 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次,在《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)伤寒沙门菌检定要求的基础上,进一步应用16S rRNA基因序列分析、多位点序列分型(multilocus sequence type,MLST),并以伤寒主要抗原表位Vi抗原片段中毒力基因viaB区域为参考基因组,比对连续传代伤寒工作种子基因序列的遗传稳定性.结果 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次种子,表型鉴定结果均符合《中国药典》伤寒沙门菌检定要求;连续传代至第30代次,Vi抗原血清凝集效价、0抗原血清凝集效价均未发生明显变化;16S rRNA基因序列鉴定PCR产物大小在1 474～1 478 bp之间,与NC-BI数据库比对鉴定均为肠沙门菌肠亚种伤寒血清型;MLST分型结果表明,疫苗用伤寒沙门菌Ty2株为ST1型,连续传代30代次MLST序列分型保持一致;以伤寒Vi抗原片段中毒力基因viaB区域为参考基因组(Gene-bankD14156.1),伤寒主代种子及有、无动物源成分工作种子连续传代30代次,它们的viaB区基因序列均一致;它们与Genebank中viaB参考基因序列比对,均有3个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP).结论 无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株,经与脱脂牛奶株连续传代30代次比较,各项菌种检定结果均符合《中国药典》要求,相关基因性状保持一致且稳定,无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株遗传稳定性良好,可用于疫苗的研发和生产.