基于差异接种细胞数的高效骨髓来源巨噬细胞分离方法的建立与评价

目的 探索不同铺板细胞数接种骨髓细胞对分离小鼠骨髓来源巨噬细胞得率的影响.方法 依据文献中给定的常用细胞铺板范围,将分离的小鼠骨髓细胞按六种不同细胞数接种在细胞培养皿中,使用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导骨髓细胞分化为巨噬细胞后,利用细胞计数法比较各组间贴壁细胞的比例差异,采用流式细胞术、间接免疫荧光法检测巨噬细胞的标志物F4/80,根据F4/80来判断巨噬细胞分化的阳性率,并最终比较各组之间骨髓来源巨噬细胞的得率.结果 在6.7×105个/cm2～14.7×105个/cm2 细胞数范围内,按照6.7×105个/cm2 细胞数进行铺板,能够获得最高的贴壁细胞比例且贴壁细胞中F4/80+巨噬细胞得率最高,在获得相同数量巨噬细胞的前提下,该细胞数能够节省40％～53％制备巨噬细胞所需要的模型小鼠.结论 按照6.7×105个/cm2的铺板细胞数进行骨髓细胞铺板,骨髓来源巨噬细胞的得率最高.