邻苯二甲酸二丁酯和苯并(a)芘染毒对大鼠T淋巴细胞亚群比例及Foxp3表达水平的影响

目的 探讨分析邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和苯并(a)芘(BaP)的免疫损伤机制,通过DBP和BaP亚慢性染毒大鼠,分析T淋巴细胞亚群比例以及叉头螺旋翼状转录因子3(Foxp3)表达水平的变化情况,为DBP、BaP所致的免疫损伤机制研究及预防提供研究线索.方法 将80只健康的SD大鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(给予玉米油)、DBP 50 mg/kg组(标为DBP50组)、DBP 250 mg/kg组(标为DBP250组)、BaP 1 mg/kg组(标为BaP1组)、BaP 5 mg/kg组(标为BaP5组)、DBP 50 mg/kg+BaP 1 mg/kg组(标为DBP50+BaP1组)、DBP 250 mg/kg+BaP 5 mg/kg组(标为DBP250+BaP5组),每组10只大鼠,采取灌胃方式进行染毒,连续染毒90 d,其中每周连续染毒6 d.染毒结束后提取及纯化大鼠淋巴细胞,采用流式细胞术检测淋巴细胞内各亚群比例;反转录实时荧光聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测Foxp3 mR-NA的表达水平;蛋白质免疫印迹(WB)检测淋巴细胞内Foxp3蛋白的表达水平;实验结果用x-±s表示,组间比较用方差分析,进行两两比较,若方差齐性采用Tukey's检验,若方差不齐性采用Games-Howell检验,并采用Pearson相关分析Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平、CD4+T、CD8+T淋巴细胞比例的相关性.结果 DBP、BaP染毒后,CD4+T淋巴细胞比例溶剂对照组(18.433±1.718)％与DBP50组(6.873±0.645)％、DBP250组(3.747±0.153)％、BaP1组(6.303±0.746)％、BaP5组(6.257±0.471)％、DBP50+BaP1组(6.933±0.628)％、DBP250+BaP5组(3.637±0.137)％比较,差异有统计学意义,P值分别为0.018、0.019、0.013、0.020、0.019和0.019;BaP5组(6.257±0.471)％与DBP250+BaP5组(3.637±0.137)％比较,差异有统计学意义,F=194.80,P=0.034.CD8+T淋巴细胞比例溶剂对照组(32.870±1.035)％与DBP50组(29.703±0.319)％、DBP250组(18.160±1.185)％、BaP1组(30.707±1.320)％、BaP5组(19.393±0.833)％、DBP50+BaP1组(30.247±1.665)％、DBP250+BaP5组(11.397±1.108)％比较,差异有统计学意义,P值分别为0.004、<0.001、0.035、<0.001、0.013、<0.001;DBP250+BaP5组(11.397±1.108)％与DBP250组(18.160±1.185)％、BaP5组(19.393±0.833)％比较,差异有统计学意义,F=151.50,均P值<0.001.Treg细胞比例溶剂对照组(4.150±0.101)％与DBP50组(7.057±0.656)％、DBP250组(8.257±0.633)％、BaP1组(6.810±0.514)％、BaP5组(7.963±0.337)％、DBP50+BaP1组(7.300±0.501)％、DBP250+BaP5组(11.921±0.652)％比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP250+BaP5组(11.921±0.652)％与DBP250组(8.257±0.633)％、BaP5组(7.963±0.337)％比较,差异有统计学意义,F=74.98,均P<0.001.Foxp3 mRNA表达水平的溶剂对照组(1.000±0.094)与DBP250组(1.654±0.007)、DBP250+BaP5组(2.224±0.111)比较,差异有统计学意义,P值分别为0.029和0.001;DBP50+BaP1组(1.412±0.007)与DBP50组(1.257±0.010)、BaP1组(1.233±0.015),差异有统计学意义,P值分别为<0.001、0.003;DBP250+BaP5组(2.224±0.111)与DBP250组(1.654±0.007)、BaP5组(1.480±0.009)比较,差异有统计学意义,F=177.50,P值分别为<0.001、0.031.Foxp3蛋白的溶剂对照组(0.162±0.013)与DBP50组(0.286±0.031)、DBP250组(0.376±0.016)、BaP1组(0.243±0.021)、BaP5组(0.275±0.029)、DBP50+BaP1组(0.397±0.031)、DBP250+BaP5组(0.472±0.024)比较,差异有统计学意义,P值分别为<0.001、<0.001、0.001、<0.001、<0.001、<0.001;DBP50+BaP1组(0.397±0.031)与DBP50组(0.286±0.031)、BaP1组(0.243±0.021)％比较,差异有统计学意义,均P<0.001;DBP250+BaP5组(0.472±0.024)与DBP250组(0.376±0.016)、BaP5组(0.275±0.029)比较,差异有统计学意义,F=62.40,均P<0.001.进一步做Pearson相关性分析显示,DBP、BaP联合染毒时,Treg淋巴细胞比例与Foxp3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.969,P=0.001),与CD4+T、CD8+T淋巴细胞比例呈负相关关系,r值分别为-0.863和-0.879,P值分别为0.027和0.021.结论 DBP、BaP暴露可能通过上调Foxp3的表达水平,促进Treg细胞分化和发育,使其比例增大,从而抑制CD4+T、CD8+T细胞的比例,此可能是DBP、BaP对淋巴细胞产生免疫抑制作用的机制之一,DBP、BaP可能通过此过程造成免疫系统的损伤,也为DBP、BaP的防治提供依据.