可控式转基因骨髓间充质干细胞复合β-磷酸三钙促成骨效应的实验研究

目的:观察与支架材料三维培养后,可控式碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合音猬因子(Shh)的时序基因传递对骨髓间充质干细胞促成骨效应的调控作用.方法:使用受四环素调控的重组腺相关病毒rAAV2-tet-off-bFGF以及rAAV2-Shh共同感染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),体外与β-磷酸三钙(β-TCP)复合三维培养.扫描电镜观察细胞附着于材料表面的形貌.MTT检测复合物中细胞的增殖状况.实时定量PCR检测复合物中细胞内各成骨相关因子mRNA的表达变化.结果:扫描电镜可见三维培养后15 h两组细胞已黏附于材料表面,至培养后4 d,细胞呈多角形向材料内部孔隙伸展.MTT显示转基因BMSCs与β-TCP复合三维培养5 d后细胞增殖明显,与其它两组比较均有统计学差异.实时定量PCR及碱性磷酸酶检测发现双因子时序表达组,不管贴壁培养还是三维培养,胞内成骨相关因子的表达与对照组相比均有显著升高.结论:四环素调控下能成功实现bFGF及Shh在BMSCs中的时序表达,与β-TCP复合三维培养后,转基因细胞的增殖速度、成骨相关因子的表达均有显著提升.