TC2N基因促进黑色素瘤的生长及其机制

目的 初步探讨TC2N基因对皮肤黑色素瘤(skin cutaneous melanoma,SKCM)发生的影响及其作用机制.方法 使用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)和肿瘤基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析TC2N在SKCM中的表达及与临床病理特征的关系.利用人黑色素瘤A375构建TC2N基因的过表达细胞模型,采用CCK-8法检测TC2N在细胞增殖中的作用.利用TC2N基因敲除小鼠构建皮肤黑色素移植瘤模型,观察并测量移植瘤的生长,通过免疫组化测定Ki67在移植瘤组织中的表达,分析肿瘤细胞的增殖.此外,进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)探索TC2N表达与ERK/MAPK信号通路的相关性,并利用RT-qPCR和Western blot法检测相关基因CyclinD1、c-Myc、CDK2和CyclinE1在体内外的mRNA及蛋白表达水平.结果 与正常皮肤组织比较,SKCM组织中TC2N的表达水平更高,且TC2N基因的高表达与SKCM患者的临床病理分期和淋巴结转移显著相关(P＜0.05).体外细胞实验发现,过表达TC2N基因后,A375细胞的增殖能力显著增加(P＜0.05).敲除小鼠皮下移植瘤模型结果显示,与TC2N+/+小鼠比较,TC2N-/-小鼠肿瘤质量和体积明显降低(P＜0.05),提示TC2N基因敲除后显著抑制SKCM的生长.GSEA富集分析提示TC2N与MAPK信号通路显著相关(P＜0.01),且TC2N基因与ERK/MAPK下游基因表达呈正相关(P＜0.01).体内外实验均发现,TC2N表达显著促进ERK与p-ERK表达,且影响ERK相关分子CyclinD1、c-Myc、CDK2和CyclinE1的mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.01).结论 TC2N基因可能通过激活ERK/MAPK信号通路促进皮肤黑色素瘤的生长.