宁波市腹泻患者隐孢子虫分子鉴定及基因特征分析

目的 通过了解宁波市某哨点医院临床腹泻患者隐孢子虫感染情况及基因特征分析,为临床探究腹泻病因提供新思路.方法 2019年11月—2021年7月,收集宁波市某哨点医院临床腹泻患者粪样650份,提取粪样中基因组DNA,巢式PCR扩增隐孢子虫核糖体小亚基RNA(SSU rRNA)基因,产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测.扩增出条带的阳性粪样DNA进行60-kDa糖蛋白(gp60)基因的巢氏PCR扩增,产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测.将与目的条带大小相近的PCR扩增产物进行双向测序,根据GenBank公共数据库资源行BLAST分析,使用Clustal X 2.1软件比对和校准,根据序列分析结果进行隐孢子虫虫种鉴定和亚型分型.运用Mega 11.0软件,以neighbour-joining(N-J)法绘制系统进化树.结果 收集的粪样中男性腹泻患者369份(56.8％),女性腹泻患者281份(43.2％);年龄分布为1～99岁.经SSU rRNA基因扩增,仅1份DNA样品在830 bp左右出现特异性条带,呈隐孢子虫阳性.患者为53岁的男性,农民,水样便.经核苷酸序列分析,鉴定为火鸡隐孢子虫感染,与上海市人源分离株、黑龙江省奶牛源分离株、云南省鸡源分离株等的序列同源性为100％,系统进化树均落入同一分支.经gp60基因扩增,在955 bp左右出现特异性条带,鉴定为Ⅲb亚型家族,与人源ⅢbA24G1R1亚型的同源性最高(99.8％);经序列比对,为火鸡隐孢子虫新亚型ⅢbA26G1(GenBank登录号:OQ032548).结论 宁波地区临床腹泻患者中鉴定到人兽共患的火鸡隐孢子虫,提示应加强腹泻人群隐孢子虫的监测和流调溯源.