短短芽孢杆菌X23中edeB基因的克隆、原核表达及转录时相分析

DU Jie,CAI Hailin,HUANG Binbin,HUANG Jun,ZHANG Cuiyang,LONG Qingshan,ZHANG Liang,CHEN Hairong,TANG Bingxuan,CHEN Wu,LIU Qingshu

Acta Laser Biology Sinica（2023）

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摘要

短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)X23可产生非核糖体肽类抗生素伊短菌素,已被广泛用于植物病害的生物防治.伊短菌素合成基因簇中,edeB基因参与调控伊短菌素的合成积累.本研究利用基因同源重组技术,以edeB基因作为外源基因的重组片段,构建了原核表达载体pET28a-edeB,转化至大肠杆菌BL21(DE)中进行诱导表达;通过转录组测序检测edeB基因在短短芽孢杆菌不同培养时间(12、18、24、30和36 h)的转录时相.结果表明:edeB基因全长为771 bp,编码256个氨基酸.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,在分子质量为30 kD处有一条特异条带,与生物信息学预测的EdeB蛋白的大小一致,且EdeB蛋白主要以包涵体的形式存在.转录时相分析结果表明,edeB基因在各个培养时间点均有表达,表达模式为先升高后降低,且在30 h时表达水平最高.这些结果为进一步研究edeB基因调控伊短菌素合成积累的分子机制奠定了基础,为短短芽孢杆菌高产伊短菌素菌株的构建提供了理论依据.

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