ALKBH5调控大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的作用研究

目的 探讨6-甲基腺嘌呤(m6 A)去甲基化酶ALK-BH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用.方法 取1～3 d新生SD乳鼠心脏,剪碎消化后进行CFs原代培养,并在显微镜下观察细胞形态.细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型,模型构建成功后分别向各组细胞转染ALKBH5(慢病毒过表达ALKBH5)及慢病毒空载体24～48 h.运用RT-qPCR方法检测ALKBH5、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达;Western blot检测ALKBH5、α-SMA、CollagenⅠ及PCNA蛋白的表达;CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖活性变化.结果 在CFs活化增殖模型中,与对照组CFs相比,模型组CFs中ALKBH5蛋白和mRNA的表达降低,而与活化增殖相关蛋白PCNA、α-SMA及CollagenⅠ的表达增加.此外,在慢病毒转染ALKBH5过表达组的CFs中,α-SMA、CollagenⅠ和PCNA蛋白和mRNA同ALK-BH5病毒空载体组相比表达下降.CCK-8与EdU染色实验表明,与空载体组相比,ALKBH5过表达组CFs增殖活性受到抑制.结论 过表达ALKBH5明显抑制CFs的增殖活性,提示ALKBH5可能是参与调控CFs活化增殖的关键因子.