黄芩素对TBHP诱导小鼠髓核细胞衰老的保护作用

目的 研究黄芩素(Baicalein,BAI)对叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响.方法 取8周龄小鼠,体外分离培养髓核细胞,传代至P2～P3代.将实验分为对照组、模型组及黄芩素组3组.β半乳糖苷酶染色检测髓核细胞衰老变化.实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、p53、p16 mRNA 表达.免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测TNF-α表达水平.免疫印迹试验(Western blot)检测白细胞介素-6(IL-6)、aggrecan、p53、p16、IL-1β、TNF-α蛋白表达.结果TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,干预时间4h;黄芩素最佳干预浓度为1.0μg/mL,干预时间为24 h.与对照组比较,模型组β半乳糖染色阳性率较对照组显著升高(P＜0.05),p53、p16、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05),MMP-3 mRNA表达显著升高(P＜0.05),MMP-9 mRNA表达升高,差异无统计学意义(P＞0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.05),collagen Ⅱ mRNA表达降低,差异无统计学意义(P＞0.05),IL-6蛋白表达升高,差异无统计学意义(P＞0.05);与模型组比较,黄芩素组β半乳糖染色阳性率较模型组明显降低(P＜0.05),p53、p16、IL-1β、TNF-α mRNA 及蛋白表达显著降低(P＜0.05),MMP-3、MMP-9 mRNA 表达显著降低(P＜0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.05),collagen Ⅱ mRNA表达显著升高(P＜0.05),IL-6蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论 黄芩素能延缓TBHP诱导的小鼠髓核细胞衰老的进程.