乳铁蛋白通过调节Keap1-Nrf2信号通路改善Aβ25-35诱导的N2a细胞氧化应激和凋亡

目的 探索外源性乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)对淀粉样蛋白25-35(β amyloid 25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)细胞模型的相关作用及机制.方法 将N2a细胞随机分为空白对照组,Lf组,Aβ组和Aβ+Lf 组,应用 CCK-8 法检测细胞活力;Western Blot 检测细胞 Tau、p-Tau、Bax、Bcl-2、Caspase3、Cleaved-Caspase3、Nrf2、Keap1、HO-1等蛋白表达水平;Annexin FITC/PI双染法检测细胞凋亡比率;试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性以及氧化产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光强度、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.采用t检验和方差分析进行组间比较.结果 (1)当Aβ25-35干预浓度为20 μmol/L,干预时间为24 h时,细胞活力降至80％,且Tau蛋白磷酸化水平较空白组显著增加,表明AD细胞模型构建成功;(2)与Aβ 组相比,Aβ+Lf 组 Bel-2 表达量显著增加(t=-10.573,P＜0.001),Bax(t=40.529,P＜0.001)和 Cleaved-Caspase3/Caspase3(t=15.376,P＜0.001)表达量显著降低,差异有统计学意义;(3)与Aβ组相比,Aβ+Lf组ROS荧光强度显著减弱,MDA含量(t=10.175,P＜0.001)和LDH释放量(t=7.453,P＜0.001)显著降低;(4)与Aβ组相比,预先干预 Lf 后,Keap1 表达量显著降低(t=15.766,P＜0.001),Nrf2(t=-32.475,P＜0.001)和 HO-1 表达量(t=-6.792,P＜0.001)显著升高.结论 If可通过调节Keap1-Nrf2/HO-1信号通路改善Aβ25-35诱导的N2a细胞氧化应激和凋亡.