单增李斯特菌溶血素LLS/LLO缺失株的构建及小鼠免疫保护性研究

旨在探究单增李斯特菌溶血素S/O(LLS/LLO)对单增李斯特菌(LM)的部分生物学特性影响及单增李斯特菌溶血素S/O基因缺失株的免疫原性.利用同源重组技术在本实验室已成功构建并保存的LM90SB2△lls菌株基础上构建LM90SB2△lls-△llo,并绘制LM90SB2和LM90SB2△lls-△llo的生长曲线,测定半数致死量(LD50)、组织载菌量(同时采用灌服和腹腔注射方式)等,进行小鼠免疫保护性研究,分析溶血素基因llsB/hly缺失对LM的生长特性以及毒力的影响.结果:成功构建LM90SB2△lls-△llo缺失株,且能在体外稳定遗传.测定生长曲线,LM90SB2的生长活性略高于 LM90SB2△lls-△llo;LM90SB2的LD50为 3.65×107.23 CFU,LM90SB2△lls-△llo的LD50大于 2.7×109 CFU;通过灌服及腹腔注射,与LM90SB2相比,LM90SB2△lls-△llo在小鼠脑、肝、脾中的载菌量均明显减少,差异极显著(P＜0.01).抗体含量除第21天亲本株略高于缺失株,其余天数缺失株均略高于亲本株;通过小鼠免疫保护率结果分析,2株菌免疫后小鼠存活率均为75％,对照组小鼠存活率为30％.本研究表明,llsB/hly基因缺失对LM90SB2的毒力有明显影响,但并不会影响LM的免疫原性,缺失株LM90SB2△lls-△llo对亲本株LM90SB2的侵袭具有良好的免疫保护效果.