羊妊娠相关糖蛋白5的制备及生物信息学分析

旨在异源表达羊妊娠相关糖蛋白5(ovPAG5),并对其蛋白结构及功能进行预测分析,为ovPAG5抗体制备和羊早孕诊断技术的研发提供技术支撑.利用生物信息学方法对ovPAG5基因的编码序列进行密码子偏好性分析,根据宿主细胞HEK293的密码子偏好性对ovPAG5基因进行优化,全基因合成后构建重组表达载体pcDNA3.1(-)-ovPAG5,转染至HEK293细胞中诱导表达重组蛋白并纯化,进一步利用生物信息学软件对ovPAG5蛋白的结构及功能进行预测.结果显示,ovPAG5基因有效密码子数(NEC)和密码子适应指数(CAI)分别为51.91和0.78,表明该基因密码子选择偏性较弱.优化后ovPAG5基因密码子适用指数(CAI)由0.78提高到0.96,GC总含量由48％提高到57％,并成功合成优化的ovPAG5基因,大小与预期结果相符.重组质粒测序结果显示,其核苷酸序列与优化后基因完全一致,氨基酸未发生突变.表达的重组蛋白ovPAG5经SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析,其相对分子质量约52 kDa.生物信息学预测分析结果显示,ovPAG5蛋白具有2个糖基化修饰位点、12个B细胞抗原表位以及31个氨基酸残基组成的信号肽.其二级结构由无规则卷曲(40.81％)、延伸链(31.74％)、α-螺旋(22.17％)和β转角(5.29％)组成.本研究为今后.vPAG5抗体的制备和羊早孕检测技术的研发奠定了基础.