miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin轴与胃癌临床特征的关联性及益气化瘀解毒方抑制上皮间质转化的机制

目的:明确miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin与胃癌临床特征的关系,探讨益气化瘀解毒方抑制胃癌上皮间质转化(EMT)的作用机制.方法:生物信息学分析miR-27a-3p、RCBTB1在胃癌中的表达与临床意义;高通量测序检测小鼠肝转移瘤组织内mRNA表达差异;质粒转染构建沉默或过表达miR-27a-3p、RCBTB1的稳定细胞株;MTT检测益气化瘀解毒方含药血清对胃癌细胞增殖抑制作用;Transwell、划痕实验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的改变;脾脏注射MFC细胞建立小鼠胃癌肝转移模型并以益气化瘀解毒方干预,检测肝转移瘤数量,苏木精-伊红染色(HE)染色法检测胃癌细胞肝脏浸润情况;RT-PCR、Western Blot检测miR-27a-3p、RCBTB1、β-catenin、E-cadherin、Snail的表达.结果:miR-27a-3p在胃癌组织中较正常组织升高(P＜0.01),且Ⅳ期胃癌组织中miR-27a-3p表达较Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期增高(P＜0.05).与对照组比较,miR-27a-3p过表达组胃癌细胞侵袭迁移能力增强,miR-27a-3p沉默组细胞侵袭性减弱(P＜0.01).高通量测序显示,益气化瘀解毒方组小鼠肝转移瘤组织内RCBTB1较对照组升高,且TargetScan预测RCBTB1为miR-27a-3p的潜在靶基因.与对照组比较,过表达miR-27a-3p能抑制RCBTB1(P＜0.01),沉默miR-27a-3p能上调RCBTB1表达(P＜0.01).生信分析提示,RCBTB1低表达组胃癌患者PFI、DSS较高表达组降低(P＜0.05).细胞实验提示,沉默RCBTB1可增强胃癌细胞侵袭性(P＜0.01),过表达RCBTB1能抑制胃癌细胞侵袭性(P＜0.01,P＜0.05).与对照组比较,益气化瘀解毒方含药血清组E-cadherin表达升高(P＜0.01),Snail、β-catenin表达降低(P＜0.01,P＜0.05).体内实验显示与对照组比较,益气化瘀解毒方组胃癌细胞在肝组织中的浸润减少,肿瘤组织内miR-27a-3p、β-catenin、Snail表达下调(P＜0.01),RCBTB1、E-cadherin表达上调(P＜0.01,P＜0.05).结论:miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin是促进胃癌EMT的重要信号轴,益气化瘀解毒方能调控miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin信号以抑制EMT,进而发挥抗胃癌转移的作用.