茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制

目的:探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸(PA),对肾癌侵袭转移的作用及机制.方法:采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)试剂盒检测PA(0、20、40、80、160μmol·L-1)对细胞存活率的影响,并筛选PA浓度用于后续实验.采用克隆形成实验评估PA(0、20、40、80 μmol·L-1)对细胞增殖的作用.细胞黏附实验用来观察PA(0、20、40、80 μmol·L-1)对细胞黏附能力的效果.划痕实验和Transwell侵袭实验用来检测PA(0、20、40、80μmol·L-1)对细胞侵袭转移的影响.高内涵成像技术进一步动态观察和验证PA(0、20、40、80 μmol·L-1)对细胞运动的抑制作用.PA(0、20、40、80 μmol·L-1)对细胞中侵袭转移相关蛋白基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子(MMP/TIMP)和相关通路关键蛋白Smads表达的影响通过蛋白免疫印迹法(Western blot)来检测.结果:CCK-8结果显示,与空白组比较,PA组细胞存活率显著降低(P＜0.01),24 h时PA对ACHN细胞的半数抑制浓度(IC50)为70.42 μmol·L1.克隆形成实验显示,与空白组比较,PA组细胞克隆群数目显著减少(P＜0.01).细胞黏附实验显示,与空白组比较,PA组细胞的黏附数量显著减少(P＜0.01).划痕实验表明,与空白组比较,PA组细胞的划痕愈合率降低(P＜0.05,P＜0.01).Transwell侵袭实验显示,与空白组比较,PA组细胞的穿膜数量减少(P＜0.01).高内涵成像技术表明,与空白组比较,PA组细胞累计迁移距离更短(P＜0.01).Westernblot结果表明,与空白组比较,PA组MMP-2、MMP-9蛋白的表达降低(P＜0.01),TIMP-1蛋白的表达升高(P＜0.01).此外,与空白组比较,PA组Smad2、Smad3蛋白的表达降低(P＜0.01).结论:PA可抑制肾癌细胞的增殖、侵袭转移,其机制可能是通过Smad2/3调控MMP/TIMP的稳态平衡.