京尼平苷酸通过调控法尼醇X受体对胆管结扎诱导的胆汁淤积小鼠的影响

目的 基于法尼醇X受体(FXR)探讨京尼平苷酸(GPA)对胆管结扎(BDL)诱导的肝外胆汁淤积小鼠的影响.方法 将60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组(奥贝胆酸,40 mg·kg-1)及GPA高、中、低剂量组(100、50、25 mg·kg-1),每组10只.采用胆管结扎法复制肝外胆汁淤积小鼠模型.术后灌胃给药,每日1次,连续7d.采用比色法测定血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)的含量;采用qRT-PCR法测定肝组织中胆汁酸合成、吸收、转运相关基因(FXR、SHP、BSEP、CYP27A1、CYP8B1、NTCP、MRP3、MRP4)、抗氧化应激相关基因(Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM)、炎症相关基因及凋亡因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、NLRP3、NF-κB、Bax)、纤维化相关基因(TGF-β1、COL1A1、ICAM-1、p53)mRNA表达.采用HE染色法检测肝组织病理变化;采用天狼星红染色法检测肝组织纤维化情况;采用免疫荧光法测定肝细胞活性氧(ROS)含量.结果 与假手术组比较,模型组小鼠肝组织胆管周围有大量炎症细胞浸润,大面积的肝细胞坏死,肝脏组织结构病理损伤明显;黄疸指标AST、ALT、TBA和TBIL水平均明显升高(P＜0.01,P＜0.001);肝组织炎症因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、NLRP3和NF-κB)和凋亡因子(Bax)的mRNA表达水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);肝组织的胆管周围有明显的胶原沉积,纤维化相关基因(TGF-β1、COL1A1、ICAM-1和p53)的mRNA表达水平均显著升高(P＜0.001);肝组织的主要胆汁酸核受体(FXR、SHP)、胆汁酸顶腔侧膜外排转运体(BSEP)、胆汁酸合成主要限速酶(CYP27A1、CYP8B1)、胆汁酸重吸收转运体(NTCP)mRNA表达水平均显著降低(P＜0.01,P＜0.001),而胆汁酸基底侧膜外排转运体(MRP3、MRP4)mRNA表达水平显著升高(P＜0.001);肝细胞的ROS水平显著升高(P＜0.01),抗氧化应激基因(Nrf2、GCLC、GCLM)mRNA表达水平显著降低(P＜0.01,P＜0.001).与模型组比较,GPA高、中剂量组小鼠的肝组织胆管周围炎症细胞浸润、肝细胞坏死区明显减少,细胞形态和排列得到改善;AST、ALT、TBA、TBIL水平均显著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),小鼠肝脏IL-6、IL-1β、TNF-α、NLRP3、NF-κB、Bax mRNA 表达水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),肝组织胶原沉积明显减少,TGF-β1、COL1A1、ICAM-1、p53 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),肝细胞的ROS水平显著降低(P＜0.001),抗氧化应激基因(Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM)mRNA表达水平均显著升高(P＜0.01,P＜0.001);GPA高剂量组小鼠肝组织的FXR、BSEP mRNA表达水平显著升高(P＜0.01,P＜0.001),MRP3、MRP4 mRNA 表达 水平明 显降低(P＜0.05,P＜0.001),而 SHP、NTCP、CYP27A1、CYP8B1 mRNA表达水平无差异(P＞0.05).结论 GPA可能通过激动胆汁酸受体FXR的表达,促进胆汁酸排泄,改善肝内细胞炎症、氧化应激和纤维化,发挥抗BDL诱导肝外胆汁淤积小鼠的肝损伤作用.