新型NEA/Al(OH)3复合佐剂系统的构建、优化及其增强MRSA重组亚单位疫苗的免疫保护效应研究

目的 以具有自主知识产权的纳米乳(NEA)和商品化的氢氧化铝[Al(OH)3]作为配方组分,制备出新型NEA/Al(OH)3复合佐剂系统,并对增强MRSA重组亚单位疫苗免疫应答效应的作用进行研究.方法 以血清特异性IgG作为评价指标,将2种乳剂(NEA和MF59)和2种铝盐[Al(OH)3和AlPO4]进行复配筛选;采用多因素实验设计,对初步筛选出的复合佐剂成分进行三因素三水平正交实验,确定优选的NEA/Al(OH)3复合佐剂系统处方;采用金黄色葡萄球菌国际标准株(MRSA252)建立Balb/c小鼠脓毒血症动物感染致死模型,进一步对新型NEA/Al(OH)3复合佐剂系统增强MRSA重组亚单位疫苗抗原HI的免疫应答效应(特异性体液免疫应答、细胞免疫应答、免疫保护效力)进行比较研究,评价其免疫增强的保护效果及初步机制.结果 NEA和Al(OH)3的复配是优选的乳剂与铝盐复合佐剂组分;通过三因素三水平正交实验确定优化的NEA/Al(OH)3复合佐剂系统处方为:HI抗原量60μg、佐剂量200μg、NEA与Al(OH)3的配比为2∶8(w/w);脓毒血症动物模型攻毒保护的研究结果表明:基于新型NEA/Al(OH)3复合佐剂系统的MRSA重组亚单位疫苗可于首次免疫后第7天即产生特异性免疫应答,特异性IgG抗体效价最高可达1∶143 360,同时诱导出高水平的特异性细胞免疫应答(IL-12P40、INF-γ),LD90的攻毒保护率为80％,具有优于单一佐剂组的良好免疫原性及保护效果.结论 成功优选制备的新型NEA/Al(OH)3复合佐剂系统可有效增强MRSA重组亚单位疫苗的免疫应答水平和保护效力,为新型复合佐剂在重组蛋白疫苗中的应用与开发提供了重要的实验基础.